1常規3730測序
公司采用全新的3730XL測序儀，可以高自動化操作，2小時左右即可達到測序要求；液體分離膠使讀序長度達1100bp，精確讀長達800bp。利用Seqence5.2新型堿基識別與質量評分軟件，測序準確性有了極大的提高；電泳溫度可達70C，有效去除二級結構的影響；雙色激光兩側同時激發，使得靈敏度極高，熒光信號強度高度均勻，提高了測序模板DNA的濃度的適應范圍并且能進行超速測序。
公司測序特點及優勢
高素質測序隊伍：測序人員都是經過了嚴格培訓；熟練掌握所有測序儀器和測序相關實驗，認真負責的工作態度，絕不把實驗交給實習生，保證差錯率做到最小甚至杜絕！
測序速度快：菌和PCR未純化收到樣品后36小時內出結果；質粒和PCR已純化24小時出結果。
價格合理： 根據不同樣品定出不同價格，有價可以測，有樣品就可以測，用最優惠最合理的價格充分配合你的實驗和經費。
困難模板服務：高GC，發夾結構，POLY結構等，根據不同模板做出不同測序方案，量身定做，使你在測序中節省更多時間，實驗順利進行。
保密性強：交給我們東西無原則絕對保密。
測序收費約定：
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現象描述 |
可能原因 |
是否收費 |
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菌培養不好或失敗 |
挑克隆有誤，菌污染，訂單提供信息有誤 |
否 |
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質粒抽提不成功 |
質粒太大或活化方式不好、轉化不好、拷貝數低、培養方式不當 |
否 |
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測序無信號、信號弱 |
引物與模板結合不好（引物或模板原因） |
否 |
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鑒定質粒或PCR濃度低，取消實驗 |
建議PCR（20ul） 、質粒（30ul）去離子水溶解 |
否 |
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設計引物和序列拼接 |
大片段測序 |
否 |
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抽提出質粒但測序不成功 |
引物與模板結合不好（引物或模板原因） |
否 |
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測序雜峰 |
引物不純，模板不純 |
是 |
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信號中斷或衰減 |
高級結構，GC rich，重復序列。 |
是 |
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測序雙峰 |
非單克隆、雜合子、引物特異性差、重復序列、Poly（A/T/G/C）結構、PCR非特異性擴增 |
是 |
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空載體 |
插入失敗,培養過程中片段丟失 |
是 |
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客戶提供引物導致結果不理想 |
引物不純，引物不合適測序 |
是 |
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PCR原液純化后但測序不成功 |
引物與模板結合不好（引物或模板原因） |
收純化費,不收測序費 |
測序收費價格（參考）
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類型 |
價格 |
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3730測序（5000－1w以上反應） |
14元/反應 |
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3730測序（1000－4999反應） |
16元/反應 |
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3730測序（1000以下，不低于96個/批） |
18元/反應 |
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3730測序（批量樣品>48個） |
20元/反應 |
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3730測序（零散樣品，小于48個） |
25元/反應 |
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PCR純化 |
5元/反應 |
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引物合成 |
1.3/bp |
測序樣品要求
PCR原液：片斷通常大于200bp；提供濃度大于50ng/ul，體積大于50ul；2ul電泳檢測主帶清晰。
PCR已純化：PCR產物溶于超純水中；濃度大于30ng/ul，體積大于20ul；電泳檢測條帶單一。
質粒 ：質粒濃度大于100ng/ul，體積大于20ul；大質粒需要注明載體長度。
菌液模板要求：說明載體的抗性，我們提供Amp 、kan、chl、tet四種抗生素；
于低拷貝質粒請直接提供1ug純化質粒；
提供1ml左右的過夜培養菌液，于離心管中封口保存，防止交叉污染或泄漏，特別是熱天路遠的最好加15%的甘油，這樣處理一下以免菌死掉。
建議盡量提供穿刺培養的菌種，或用新鮮的菌裝到冰盒里運輸
引物要求：濃度大于3.2umol/l，體積大于20ul；
隨機引物、兼并引物或堿基長度大于30bp不適合測序；
盡可能提供引物全序列，PCR退火溫度；.
T7、SP6、M13(+)、M13(-)、T3等通用引物我們免費提供。
樣品類型及注意事項
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樣品類型 |
收樣標準 |
注意事項 |
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菌 |
500-1000ul新鮮菌液 |
可以提供5ml菌液或沉淀菌體直接提取質粒 |
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質粒 |
濃度要求大于100ng/ul，大于20ul（反應個數多相應增加） |
建議送前鑒定濃度。建議不要溶于TE，要溶于超純水。因為TE離子濃度很高，抑制測序反應，建議純化后溶于15-20ul超純水中 |
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PCR已純化 |
濃度要求大于50ng/ul，20ul左右（反應個數多相應增加） |
建議送前鑒定濃度。請注意我處是取2ul原液用1％瓊脂糖膠鑒定，客戶經常會取5ul鑒定。建議純化后溶于15-20ul超純水中 |
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PCR未純化 |
濃度要求大于50ng/ul，大于50ul（不宜分離相差小于150BP的多個片段） |
建議送前鑒定濃度。請注意我處是取2ul原液用1％瓊脂糖膠鑒定，客戶經常會取5ul鑒定。如濃度過低我們會直接停止實驗，通知客戶重供樣。 |