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單細胞測序


簡介:

      單細胞基因組測序是基于單個細胞水平上采取高質量的全基因組擴增與測序相結合的一項新技術,用于揭示細胞群體差異和細胞進化關系。該技術目前主要應用于腫瘤發生機制及胚胎發育研究。由于腫瘤細胞之間具有異質性,采用該項技術不需培養細胞,可最真實的獲得單克隆癌細胞的具體突變來源及精準的突變頻率,以及區分癌癥發生、發展、演化過程中的主動與被動突變等。

一、生物信息分析

1. 原始數據整理、過濾及質量評估

2. 基因組重測序和外顯子測序分析:
    ♦與參考基因組比對
    ♦SNPs和InDel的檢測
    ♦SNPs和InDel的注釋

3. 根據客戶需求進行個性化分析

二、樣品要求

組織樣品:必須是在手術切除后立即冷凍保存(液氮或-80℃),保存時間在一年之內;對于腫瘤樣品所取樣品大小建議為1-2cm3(過大不利于樣品的凍存,過小則不能滿足取樣用量),對難取樣或珍貴的標本,樣品大小至少5mm3。

全血(或骨髓)樣品:不少于5mL,需用抗凝采血管取樣和抗凝管分裝,并且在-80℃保存;
細胞懸液或細胞系:建議細胞數不少于105個,需按照細胞凍存的標準操作,使用細胞凍存液梯度降溫保存于液氮或-80℃;
單細胞樣品:細胞分選入裝有3~5μl PBS緩沖液的200μl PCR管中, 送樣細胞應經過以下步驟處理,確保無金屬離子影響實驗:
1、加500 ul PBS到100 ul細胞懸液中,4000 g離心5 min;
2、去上清,加500 ul PBS溶液重懸細胞; 
3、1400 g離心5 min;
4、重復步驟 b, c;
5、去上清,加100 ul PBS重懸細胞。
細胞分離完成后,在10min內放入-80℃(冰箱、液氮均可)或者-20℃保存,但-20℃保存不得超過3hours。每個需測序細胞建議送3-5管重復,保證后續實驗成功率。 


三、產品優勢

· 1、技術穩定、重復性高;
 ·   2、可檢測>95%基因組位點;
· 3、極低擴增錯誤率(<10-6)。


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